人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）属于乳多空病毒科的乳头瘤病毒属，是一种小分子的、无被膜包被的、环状双链DNA病毒，基因组长约8000碱基对（bp）。HPV通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。该病毒只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，能引起人类皮肤的多种乳头状瘤或疣及黏膜生殖道上皮增生性损伤。

　　HPV检测试剂盒（PCR法）是指利用包括PCR-荧光探针法或其他分子生物学方法在内的核酸检测技术，以特定高危型HPV核酸（包括DNA和RNA）序列为检测目的，对人宫颈样本(如人宫颈脱落上皮细胞)进行体外定性检测的试剂，以确定受试样本中是否存在高危型HPV病毒，或同时鉴定感染HPV的基因型别。

　　《体外诊断试剂注册管理办法》第十七条规定，根据产品风险程度由低到高，体外诊断试剂分为第一类、第二类、第三类产品。人乳头瘤病毒检测试剂盒（PCR法）属于第三类产品中的第3小类，按Ⅲ类产品进行管理，属于国家重点监管目录产品。

　　该类产品的风险点主要存在于以下环节。

　　设计开发环节

　　产品设计开发是产品性能最源头的一步，产品生产时所用的每一个原材料都应该在设计开发环节得到筛选和验证，原材料的优劣在产品的整体性能上起着关键作用。HPV检测试剂盒（PCR法）的主要原材料包括引物、探针、酶、dNTP、核酸分离/纯化组分（如有）及企业参考品、试剂盒对照品（质控品）等。

　　目前市场上用于HPV检测试剂盒的引物和探针主要是生产企业自己研发设计和外部供应商合成两种方式。作为试剂盒的关键因素，引物和探针的筛选和验证必不可少。引物、探针的质量标准应至少包括纯度检查、浓度检查及功能性实验等。

　　HPV检测试剂盒需要的酶主要包括DNA聚合酶，其质量标准应包括DNA聚合酶活性、核酸内切酶活性、热启动能力、热稳定性等；还可能涉及尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）和逆转录酶，亦应分别对其酶活性等进行评价和验证。

　　HPV检测试剂盒所用的dNTP质量标准应至少包括纯度检查及功能性实验等。

　　标准品的作用是产品性能溯源的根源。目前市场上用于HPV检测试剂盒采用的主要是第三方标准品或是企业自行制备的企业参考品两种，如果是采用第三方标准品对试剂盒性能进行确认，则标准品的来源、标准品使用时的性能状态等是这一环节的风险点，如果是采用企业自行制备的企业参考品，则参考品的制备过程、定值过程等是这一环节的风险点。

　　采购环节

　　采购环节中的风险点主要来源于主要原材料的采购，其中包括是否与主要原材料供应商签订质量协议、是否对主要原材料进行批检验、批检验是否具有可追溯性、供应商变更时是否重新签订质量协议并对新供应商提供的原材料进行筛选验证等。

　　生产管理环节

　　生产管理环节的风险点主要存在以下几个方面。

　　第一，HPV检测试剂盒（PCR法）生产需要在洁净生产区，因此生产区环境是否达到相应规定非常重要。生产区除了需要第三方的检测，还需要企业有日常按相应规定的管理和监测，进入生产区的人员应穿着符合要求的工作服和帽子，不同区域的衣服不得混用，人员走向为单一走向。

　　第二，试剂盒生产时所使用的原材料是否与设计开发环节确定的原材料一致，对主要原料是否进行了物料平衡核算，投料是否有双人复核称量等，这些因素都有可能影响产品的最终质量。

　　第三，生产过程中应标识产品的检验状态，不合格的中间品或成品都应该有专门的存放和处理，防止不合格品出现在合格产品区。

　　第四，由于HPV检测试剂盒（PCR法）的阳性参考品、企业参考品等制备提纯过程中容易产生气溶胶污染，参考品的制备、分装、保存环节、具有潜在污染或传染性的废弃物处理环节也是生产管理环节中的风险点之一。

　　质量控制环节

　　企业的质量控制首先要保证检验区的状态是否满足实验要求，原料/半成品、成品检验规程应与产品技术要求相符，并进行具有可追溯性的批检验。产品技术要求、检验规程应尽可能满足或优于YY/T1226-2014《人乳头瘤病毒核酸（分型）检测试剂（盒）》等相应法规标准要求。

　　分析与改进环节

　　HPV检测试剂盒（PCR法）一直在不断创新和改进，从一开始的对高危型HPV病毒进行定性检出到现今出现部分HPV检测试剂盒（PCR法）可同时鉴定感染HPV的基因型别，当产品发生设计更改时应进行评审或变更注册，各个环节都应一一确认。

　　（作者单位：广东省医疗器械质量监督检验所）

(责任编辑：何璇)